您所在的位置: 首頁>>實用技術>>正文
 
 
飼料中硒的測定方法-二氨基萘熒光法
2020-08-19 15:06   中国农业网

1 主题内容与适用范围

本标准规定了用 2,3-二氨基萘(DAN)荧光法测定饲料中硒的方法。

本标准适用于配合饲料、预混合料、浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。在萃取液中检测范围为 0.001~0.1 μ g/ mL (以Se计)。

2 引用标准

GB 1.4 标准化工作导则 化学分析方法标准编写规定

GB 6682 实验室用水规格

3 方法原理

先将试样中有机物破坏,使硒游离出来,在微酸性溶液中硒( IV)和2.3-二氨基萘(DAN)生成4.5-苯基苯并硒二唑,用环己烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取,用荧光光度计测定其荧光强度。

4 试剂

实验室用水应符合 GB 6682中二级用水的规格,使用试剂除特殊规定外,应为分析纯。

4.1 高氯酸 优级纯( ρ 1.67g/ mL )。

4.2 硝酸 优级纯( ρ 1.42g/ mL )。

4.3 环己烷 ρ 0.778~0.80g/ mL 。

4.4 盐酸 优级纯(1+3)。

4.5 盐酸 C ( HCl ) =0.1mol/L。

4.6 氨水 ρ 0.90g/ mL 。

4.7 盐酸羟胺-乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液

称取 10gEDTA溶于500mL水中,加入25g盐酸羟胺使其溶解,用水稀至1000mL。

4.8 2,3-二氨基萘(DAN)溶液

称取 DAN0.1g于150mL烧杯中,加入100mL0.1mol/L盐酸使其溶解,转移到250mL分液漏斗,加入20mL环己烷(4.3)振荡1min,待分层后弃去环己烷,水相重复用环己烷处理2~3次。水相放入棕色瓶中上面加盖3mm厚的环己烷,于暗处保存,此液可使用数周。

4.9 硒标准贮备溶液

称取硒粉(纯度 99%以上)25mg(精确至0.01mg),入100mL烧杯中,加入10mL硝酸加热溶解,冷至室温,用水转移至1000mL容量瓶中并稀至刻度,摇匀,此液 1mL含25.00 μ g的硒。

4.10 硒标准工作溶液

吸取( 4.9)溶液1.00mL、入50mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟 5min,取下稍冷,加1mL水和1mL盐酸(4.4)摇匀,放置10min用盐酸(4.5)转移至250mL容量瓶中并稀至刻度摇匀,此液1.00mL含硒0.1μg。

4.11 甲酚红

0.4g/L水溶液,稱取0.1g甲酚紅入400mL燒杯中,加少許水加氨水(4.6)使其溶解用水稀至250mL,搖勻。

5 仪器、设备

5.1 荧光光度计

激发波长 365~385nm,荧光发射波长520~525nm,1cm石英比色杯。

5.2 实验室用样品粉碎机

标准分析筛孔径( 0.42、0.25mm)。

5.3 分析天平分度值0.0001g。

5.4 可调温电炉(600W)或电热板(3000W)。

5.5 高型烧杯50mL和相应大小的表面皿。

5.6 具塞比色管50mL。

5.7 刻度吸量管2mL、10mL。

6 试样的制备

取已粉碎至 0.42mm的试样40~50g入250mL烧杯中加水至能搅动的糊状,在搅拌器上搅10~15min,倒在小搪瓷盘中铺平,放入烘箱70℃烘干,粉碎机上磨至0.25mm,混匀装入密封容器中备用,防止试样成分变化。

7 分析步骤

7.1 试样测定(配合饲料、浓缩料、单一饲料)

称取已制备好的试样约 1g,精确至0.0001g(≤0.4 μ gSe),放入50mL高型烧杯中,用少量水润湿试样加硝酸(4.2)10mL,轻摇烧杯使试样散开,加盖表面皿放到电热板(5.4)上低温加热见反应开始(泡沫开始上冒),切断电源或取下待剧烈反应缓解(气泡不上涌)后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5mL左右,取下稍冷加入5mL高氯酸(4.1)继续加热至剧烈小气泡冒完,高氯酸冒烟;取下稍冷,用水吹洗表面皿和杯壁,去掉表面皿,将烧杯置电热板上先低温蒸发水分,再升温至高氯酸冒烟并保持5~10min,取下稍冷,加入1mL水和1mL盐酸(4.4),摇匀,放置10min,水稀至30mL左右,加二滴甲酚红(4.11),用氨水(4.6)中和至黄色,再用盐酸(4.4)中和至橙色(pH1.5~2),加入3mL盐酸羟胺溶液(4.7)摇匀,用盐酸(4.5)转移到50mL比色管中(5.6),加2mLDAN 溶液(4.8),盖好塞子,摇匀,松动塞子,置于100℃水中保持5min。取出放入冷水中迅 速冷却至室温,用盐酸(4.5)稀至50mL,加5mL环己烷(4.3)振荡1min,静置分层后,用吸管小心吸取上部环已烷入1cm石英杯中,置入荧光光度计内于激发波长375~380nm,发射波长520~525nm测其荧光强度,在标准曲线上查得试料中硒的含量。

同時做空白試驗(消化時應戴防護眼鏡)。

7.2 高含量硒样品(预混合料)的测定

对于每千克含硒在 1mg以上含有机物的样品,按(7.1)进行至加入1mL水和1mL盐酸(4.4)摇匀,放置10min后将消化液稀释至足够体积,然后取部分溶液(Se≤0 .4 μ g)进行测定。对于以石粉为载体的预混料,称取1~5g样品(精确到0.0001g),于 250mL烧杯中,加入20mL水和25mL硝酸(4.2)(逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部加入),盖表面皿,置电热板上煮沸,低温沸腾30min,取下冷却,用水转移到100~500mL容量瓶中稀释至刻度,摇匀,取部分澄清液(Se≤0.4 μ g)入50mL高型烧杯中,加入5mL高氯酸(4.1),以下按7.1 加高氯 酸后程序进行。

7.3 工作曲线的绘制

取 0.00,0.50,1.00,1.50,2.00,3.00mL硒标准溶液(4.10),分别入50mL具塞比色管中,加入3mL盐酸羟胺溶液(4.7)、2滴甲酚红指示剂(4.11),以下按7.1用氨水中和起操作进行,以下按7.1用氨水中和起操作进行,以硒量为横坐标,荧光强度为纵从标,绘制工作曲线。

8 分析结果计算和表述

硒的含量( mg/kg)按下式计算:

Se ( mg/kg)= m 1 V 0 /( m 0 V 1 )

式中: m 1 ──

自工作曲线上查得的硒量,μ g;

V 0 ──

试液的总体积, mL ;

V 1 ──

分取试液的体积, mL ;

m 0 ──

试料的质量, g。

所得结果应表示至三位小数: 0.001mg/kg。

9 允许差

室內每個試樣應稱兩份試料進行測定,以其算術平均值爲分析結果,其間分析結果的相對偏差應不大于下表所列允許差。

硒含量,mg/kg 允许偏差,%

≤0.100 40

>0.100~0.200 30

>0.200~0.400 20

>0.400 15

關閉窗口
相關文章:
  讀取內容中,請等待...
 
地区:北京市  广东省  山东省  江苏省  河南省  上海市  河北省  浙江省  香港特别行政区  陕西省  湖南省  重庆市  福建省  天津市  云南省  四川省  广西壮族自治区  安徽省  海南省  江西省  湖北省  山西省  辽宁省  台湾省  黑龙江  内蒙古自治区  澳门特别行政区  贵州省  甘肃省  青海省  新疆维吾尔自治区  西藏区  吉林省  宁夏回族自治区
上海 北京 沈阳 深圳 广州 天津 佛山 杭州 青岛 苏州 香港 太原 呼和浩特 石家庄 长春 南京 合肥 南昌 福州 南宁 武汉 长沙 济南 郑州 成都 西安 兰州 银川 乌鲁木齐 西宁 拉萨 昆明 贵阳 海口 台北 澳门